必知干货—DAB染色液的使用方法及注意事项

　　必知干货—DAB染色液的使用方法及注意事项

　　DAB染色液用于免疫组化染色，应用在Dako 自动染色系统上。

　　DAB染色液的使用方法

　　1.DAB显色液配制

　　10mM Tris-HCl (pH7.6) 9mL +DAB (diaminobezidin 3，3-二氨基联苯胺) +0.3%(W/V) NiCl2 或CoCl2 1mL ,显色时加入5-10mL 30%H2O2 混匀后立即使用

　　2. 显色

　　准备好含有待测蛋白的固相膜：包括电泳、转印、封阻、一抗(或生物素)处理、辣根过氧化酶(HRP)标记的二抗(或链霉亲和素)处理、清洗等步骤。

　　3.加入适量的DAB显色液，铺满整个固相膜表面(可按比例增减)。

　　4. 置于平式摇荡仪上，在室温下孵育2至5分 钟，避免光照(暗室操作)，直至棕褐色沉淀出现。

　　5.用镊子夹起固相膜，放进无离子水里清洗。

　　6.空气中晾干。

　　7. 拍照记录 。

　　DAB染色液的注意事项

　　1. DAB溶液应低温密封保存。如有结晶析出，应确保结晶溶解再行使用;

　　2. 显色工作液应现用现配，新鲜配制的工作液应为无色或浅棕色，如颜色过深，请勿使用;

　　3. DAB在常温下不稳定，每次取用后均应及时加盖密封放回冰箱，以免因DAB分解影响实验，或因渗漏造成实验环境污染;

　　4. DAB有潜在致突变作用，操作时应注意穿戴好防护用具。

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